|
|
Studium retence a separace peptidů v HPLC
Boudová, Hana ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
Tato diplomová práce se zabývá studiem retence a separace strukturně odlišných peptidů a štěpných produktů cytochromu c pomocí kapalinové chromatografie v reverzním a smíšeném (mix) módu. Mezi modelové peptidy bylo vybráno pět nemodifikovaných dipeptidů, devět dipeptidů obsahující chránicí benzoylovou skupinu na N-koncové aminokyselině a osm terapeutických peptidů (penta- až dekapeptidy). Chromatografické chování modelových peptidů bylo testováno na třech různých kolonách: XBridge C18, XSelect CSH C18 a Atlantis Premier BEH C18 AX za různých podmínek. Byl testován vliv pH vodné složky mobilní fáze, tj. 2,1; 3,0; 4,7 a 6,8, a množství acetonitrilu v mobilní fázi na retenci a separaci vybraných peptidů. Dále byl sledován vliv koncentrace octanu amonného o pH = 6,8 v mobilní fázi na retenci a symetrii píků peptidů v koncentračním rozmezí 10-50 mmol l-1 . Byly optimalizovány chromatografické podmínky pro separaci 20 modelových peptidů na základní linii na koloně XSelect CSH C18 v mobilní fázi acetonitril/10mM octan amonný, pH = 6,8, (v/v) za použití gradientové eluce. V rámci této práce byly také optimalizovány chromatografické podmínky pro analýzu a identifikaci fragmentů trypticky naštěpeného cytochromu c. Mix mód kolona Atlantis Premier BEH C18 AX vykazovala nejvyšší selektivitu pro sledované...
|
|
|
Charakterizace a porovnání nových kolon v reverzním módu HPLC
Putzová, Klára ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Předkládaná bakalářská práce je zaměřena na zjištění a porovnání interakčních a separačních vlastností tří kolon, XBridge C18, XSelect CSH C18 a XSelect HSS C18 určených pro reverzní mód vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Všechny kolony obsahují oktadecylový ligand, ale liší se v typu nosiče, na který je ligand vázaný. Kolony byly porovnány z hlediska jejich silanolové aktivity, indexu hydrofobicity, tvarové selektivity a účinnosti za použití jednoduchých testů podle autorů Walterse, Engelhardta a Galushky. Dále byly optimalizovány podmínky pro separace vybraných pesticidů acetochloru, fomesafenu, isoproturonu, metazachloru a triflumuronu v mobilních fázích obsahujících acetonitril nebo methanol jako organický modifikátor a vodu. Testované kolony vykazovaly nízkou silanolovou aktivitu a střední až vysoký index hydrofobicity. Nízká silanolová aktivita všech tří kolon koreluje s tzv. endkapingem všech tří testovaných fází. Analyty byly více zadržovány v methanolové mobilní fázi, což souvisí s nižší eluční silou methanolu v porovnání s acetonitrilem v reverzním módu vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Doba analýzy vybraných pesticidů se lišila pro jednotlivé kolony při použití stejných chromatografických podmínek. Nejkratší doba analýzy byla získána na koloně XBridge C18, která také vykazovala...
|
|
|
Chladová adaptace ve stacionární fázi u Bacillus subtilis
Beranová, Anna ; Konopásek, Ivo (vedoucí práce) ; Svobodová, Jaroslava (oponent)
Chladová adaptace ve stacionární fázi u Bacillus subtilis Teplota je jedním z nejdůležitějších abiotických faktorů, které ovlivňují život bakteriální buňky. Nízká teplotu snižuje fluiditu cytoplazmatické membrány. Zatímco chladová adaptace u Bacillus subtilis během exponenciální fáze je relativně dobře prozkoumána, adaptace během stacionární fáze doposud systematicky prozkoumána nebyla. Stacionární fáze růstu je přitom nejobvyklejším stavem, ve kterém se mikroorganismy v přírodě vyskytují. Bakterie Bacillus subtilis uplatňují dva nezávislé mechanismy, kterými potřebnou fluiditu membráně navrací - krátkodobou a dlouhodobou adaptaci. Krátkodobá adaptace je závislá na funkci desaturázy mastných kyselin (kódované genem des), dlouhodobá adaptace spočívá ve změně poměru iso- a anteiso- větvených mastných kyselin ve fosfolipidech membrány. V této práci byla sledována adaptace membrány na stálou nízkou teplotu a na náhlé snížení teploty během stacionární fáze. Při stálé nízké kultivační teplotě, byla zaznamenána nejvyšší aktivita promotoru des při 25 řC, po náhlém snížení teploty byla zjištěna největší aktivita po přenosu z kultivační teploty 37 řC do 25 řC. Měřením anizotropie a analýzou mastných kyselin bylo zjištěno, že membrána stacionárních buněk kultivovaných při 37 řC je méně fluidní než membrána...
|
|
|
Charakterizace chirálních a achirálních chromatografických separačních systémů
Kučerová, Gabriela ; Tesařová, Eva (vedoucí práce) ; Čabala, Radomír (oponent) ; Ševčík, Juraj (oponent)
Předkládaná dizertační práce, tvořená komentovaným souborem pěti publikací, se zabývá charakterizací a aplikačním potenciálem cyklodextrinových a polysacharidových chirálních stacionárních fází a dále stacionárních fází na bázi makrocyklických antibiotik, přičemž není studován pouze vliv daných stacionárních fází, ale je kladen důraz i na složení mobilní fáze. Tento přístup zajišťuje komplexní pohled na daný separační systém. Byly studovány systémy s rozdílnou povahou chirálního selektoru ve vysokoúčinné kapalinové chromatografii. Jednalo se o chirální stacionární fáze na bázi makrocyklických antibiotik a derivatizovaných polysacharidů, přičemž pro enantioseparaci nekódovaných aminokyselin se jako nejvhodnější jevil teikoplaninový chirální selektor. Byla provedena charakterizace nové kationické chirální stacionární fáze na bázi cyklodextrinu připravené pomocí tzv. dynamického pokrývání. Charakterizační metoda lineárních vztahů volných energií byla použita pro porovnání dvou separačních systémů, tj. nově připravené stacionární fáze s komerčně dostupnou stacionární fází. Na základě získaných výsledků se pro separaci různých achirálních skupin analytů jako vhodnější jeví nově připravená stacionární fáze. Dynamickým pokrýváním připravená další stacionární fáze, která byla porovnána s chromatografickým...
|
|
|
Chromatographic characterization of polyaniline-coated stationary phases
Taraba, Lukáš
(CZ) Tato dizertační práce se zabývá fyzikálně-chemickou charakterizací stacionárních fází potažených polyanilinem. V první části byly chemickou polymerizací anilinium(1+) chloridu in-situ modifikovány povrchy sorbentů na bázi čistého silikagelu a silikagelu s navázanou oktadecylovou skupinou. Jejich následná systematická charakterizace byla provedena s použitím modelu lineárních vztahů solvatačních energií v HILIC módu kapilární kapalinové chromatografie. Dále bylo k popisu vlastností modifikovaných materiálů použito několik běžných fyzikálně-chemických technik. Modifikované sorbenty byly ve formě suspenzí naplněny do kapilárních kolon. Retenční interakce probíhající mezi analytem a separačním systémem byly zhodnoceny na základě retenčních dat pro množství různých analytů. Výsledky ukázaly, že polyanilinový povlak měl významný vliv na retenci podporující interakce pro obě stacionární fáze. Předpokládaný smíšený retenční mechanismus byl prokázán pro obě stacionární fáze. Druhá část se zabývá zkoumáním separačního potenciálu stacionární fáze potažené polyanilinem v různých chromatografických módech. Pro strukturně podobné látky byly zkonstruovány křivky retenčních faktorů závislé na podílu organického modifikátoru v mobilní fázi. Získané výsledky ukázaly, že tato stacionární fáze je použitelná ve...
|
|
|
Charakterizace a porovnání nových kolon v reverzním módu HPLC
Putzová, Klára ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Předkládaná bakalářská práce je zaměřena na zjištění a porovnání interakčních a separačních vlastností tří kolon, XBridge C18, XSelect CSH C18 a XSelect HSS C18 určených pro reverzní mód vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Všechny kolony obsahují oktadecylový ligand, ale liší se v typu nosiče, na který je ligand vázaný. Kolony byly porovnány z hlediska jejich silanolové aktivity, indexu hydrofobicity, tvarové selektivity a účinnosti za použití jednoduchých testů podle autorů Walterse, Engelhardta a Galushky. Dále byly optimalizovány podmínky pro separace vybraných pesticidů acetochloru, fomesafenu, isoproturonu, metazachloru a triflumuronu v mobilních fázích obsahujících acetonitril nebo methanol jako organický modifikátor a vodu. Testované kolony vykazovaly nízkou silanolovou aktivitu a střední až vysoký index hydrofobicity. Nízká silanolová aktivita všech tří kolon koreluje s tzv. endkapingem všech tří testovaných fází. Analyty byly více zadržovány v methanolové mobilní fázi, což souvisí s nižší eluční silou methanolu v porovnání s acetonitrilem v reverzním módu vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Doba analýzy vybraných pesticidů se lišila pro jednotlivé kolony při použití stejných chromatografických podmínek. Nejkratší doba analýzy byla získána na koloně XBridge C18, která také vykazovala...
|
|
|
Chromatographic characterization of polyaniline-coated stationary phases
Taraba, Lukáš
(CZ) Tato dizertační práce se zabývá fyzikálně-chemickou charakterizací stacionárních fází potažených polyanilinem. V první části byly chemickou polymerizací anilinium(1+) chloridu in-situ modifikovány povrchy sorbentů na bázi čistého silikagelu a silikagelu s navázanou oktadecylovou skupinou. Jejich následná systematická charakterizace byla provedena s použitím modelu lineárních vztahů solvatačních energií v HILIC módu kapilární kapalinové chromatografie. Dále bylo k popisu vlastností modifikovaných materiálů použito několik běžných fyzikálně-chemických technik. Modifikované sorbenty byly ve formě suspenzí naplněny do kapilárních kolon. Retenční interakce probíhající mezi analytem a separačním systémem byly zhodnoceny na základě retenčních dat pro množství různých analytů. Výsledky ukázaly, že polyanilinový povlak měl významný vliv na retenci podporující interakce pro obě stacionární fáze. Předpokládaný smíšený retenční mechanismus byl prokázán pro obě stacionární fáze. Druhá část se zabývá zkoumáním separačního potenciálu stacionární fáze potažené polyanilinem v různých chromatografických módech. Pro strukturně podobné látky byly zkonstruovány křivky retenčních faktorů závislé na podílu organického modifikátoru v mobilní fázi. Získané výsledky ukázaly, že tato stacionární fáze je použitelná ve...
|
|
|
Utilization of polynailine in separation methods
Riečan, Martin ; Sobotníková, Jana (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Predkladaná diplomová práca sa svojím charakterom venuje vývoju polyanilínu s vlastnosťami monolitickej stacionárnej fázy, ktorá bude vhodná pre využitie v kapilárnej kvapalinovej chromatografii. Riešeniami radu problémov spojených s prípravou polyanilínu v potrebnej forme, akými boli konzistencia vo forme roztokov, gélov a pást, veľmi rýchly priebeh polymerizačnej reakcie, obmedzená rozpustnosť sieťovacích činidiel, rozpustnosť monolitického polyanilínu v polárnych mobilných fázach a nedostatočná väzba polyanilínu na vnútornú stenu kremennej kapiláry boli výber vhodného oxidačného činidla (peroxodisíranu amónneho), sieťovacieho činidla (tris(4- aminofenyl)amínu), porogénneho činidla (metanolu), ich kľúčový pomer a následná tepelná úprava, výber vhodnej mobilnej fázy (tetrahydrofuránu), úprava steny kapiláry pomocou silanizačného činidla (N-[3-(trimetoxysilyl)propyl]anilínu) a zostrojenie aparatúry potrebnej k rýchlemu plneniu kapilár. Vo výsledku bol pripravený pevný polyanilínový monolit dobre uchytený v kapiláre s voliteľnou porozitou. Nevýhodou sú ale nekonzistentné hodnoty tlaku pri konštantnej prietokovej rýchlosti mobilnej fázy a taktiež široká variabilita výsledkov opakovanou prípravou nových kolón. Na základe zistených skutočností polyanilín vo forme monolitu je potencionálne využiteľný...
|
|
|
Chromatographic characterization of polyaniline-coated stationary phases
Taraba, Lukáš ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Srbek, Jan (oponent)
(CZ) Tato dizertační práce se zabývá fyzikálně-chemickou charakterizací stacionárních fází potažených polyanilinem. V první části byly chemickou polymerizací anilinium(1+) chloridu in-situ modifikovány povrchy sorbentů na bázi čistého silikagelu a silikagelu s navázanou oktadecylovou skupinou. Jejich následná systematická charakterizace byla provedena s použitím modelu lineárních vztahů solvatačních energií v HILIC módu kapilární kapalinové chromatografie. Dále bylo k popisu vlastností modifikovaných materiálů použito několik běžných fyzikálně-chemických technik. Modifikované sorbenty byly ve formě suspenzí naplněny do kapilárních kolon. Retenční interakce probíhající mezi analytem a separačním systémem byly zhodnoceny na základě retenčních dat pro množství různých analytů. Výsledky ukázaly, že polyanilinový povlak měl významný vliv na retenci podporující interakce pro obě stacionární fáze. Předpokládaný smíšený retenční mechanismus byl prokázán pro obě stacionární fáze. Druhá část se zabývá zkoumáním separačního potenciálu stacionární fáze potažené polyanilinem v různých chromatografických módech. Pro strukturně podobné látky byly zkonstruovány křivky retenčních faktorů závislé na podílu organického modifikátoru v mobilní fázi. Získané výsledky ukázaly, že tato stacionární fáze je použitelná ve...
|
|
|
Charakterizace chirálních a achirálních chromatografických separačních systémů
Kučerová, Gabriela ; Tesařová, Eva (vedoucí práce) ; Čabala, Radomír (oponent) ; Ševčík, Juraj (oponent)
Předkládaná dizertační práce, tvořená komentovaným souborem pěti publikací, se zabývá charakterizací a aplikačním potenciálem cyklodextrinových a polysacharidových chirálních stacionárních fází a dále stacionárních fází na bázi makrocyklických antibiotik, přičemž není studován pouze vliv daných stacionárních fází, ale je kladen důraz i na složení mobilní fáze. Tento přístup zajišťuje komplexní pohled na daný separační systém. Byly studovány systémy s rozdílnou povahou chirálního selektoru ve vysokoúčinné kapalinové chromatografii. Jednalo se o chirální stacionární fáze na bázi makrocyklických antibiotik a derivatizovaných polysacharidů, přičemž pro enantioseparaci nekódovaných aminokyselin se jako nejvhodnější jevil teikoplaninový chirální selektor. Byla provedena charakterizace nové kationické chirální stacionární fáze na bázi cyklodextrinu připravené pomocí tzv. dynamického pokrývání. Charakterizační metoda lineárních vztahů volných energií byla použita pro porovnání dvou separačních systémů, tj. nově připravené stacionární fáze s komerčně dostupnou stacionární fází. Na základě získaných výsledků se pro separaci různých achirálních skupin analytů jako vhodnější jeví nově připravená stacionární fáze. Dynamickým pokrýváním připravená další stacionární fáze, která byla porovnána s chromatografickým...
|
host ::
RSS.